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HPLC法在没食子酸测定实验中的应用
作者:管理员    发布于:2014-03-10 10:10:56    文字:【】【】【
    用HPLC法测定没食子酸的含量的实验中,HPLC仪为BECKMAN332型液相色谱仪,河北板框压滤机进样阀100L。色谱条件:色谱柱YWG-C18(10m,4250mm),流动相:甲醇水磷酸(4960.05);流速1mL/min;检测波长280nm;柱温:室温;在上述色谱条件下叶下珠中没食子酸与其他干扰峰分离良好,柱效以没食子酸的理论塔板计不得低于554。
  标准曲线的制备:精称没食子酸标准品2.0mg,用30甲醇定容至5mL容量瓶中,所得标准品溶液浓度为(04mg/mL)。精密吸取标准溶液50、100、150、200、250L用30甲醇溶液定容至5mL容量瓶中,分别吸取100L进样,测定色谱峰面积。以色谱峰面积A为纵坐标,没食子酸对照品的量为横坐标,求得回归方程为Y=388775X+1589.4(=09997),线性范围0420g,可用外标一点法计算含量。
  精密度的测定:精密吸取对照品溶液(0.4mg/mL)100L,重复进样5次,测得色谱峰面积A平均值为461293,RSD=2.78。
  稳定性实验:精密吸取对照品溶液100L每隔0.5h进样测定1次,连续实验6h,RSD=3.0,没食子酸在6h内很稳定。
  提取方法的选择:精称叶下珠细粉(40目)0.2g,分别加入30甲醇25mL,称重,超声提取20、30、40min,冷浸12、24、48h,补足原重量,过滤,取续滤液,微孔滤膜过滤后,河北滤板按色谱条件测定样品含量,实验表明冷浸法较超声波提取法没食子酸的提取率高,24h可基本稳定,故样品采用冷浸24h提取。
     
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