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微滤-超滤法与醇沉法在山楂水提取液精制中的比较研究
作者:管理员    发布于:2016-04-21 10:03:39    文字:【】【】【

  成熟果实。味酸、甘微温,入脾胃、肝经。含黄酮类、有机酸类及三萜类等。现代临床应用表明其水提取液中所含有的芦丁等黄酮类成分具有降血脂、舒张血管等作用,而含有的拘橼酸等有机酸则有抗凝血、杀菌等作用2.现代研究中,山楂水提取液通常采用醇沉法精制,但存在劳动强度大、效率低、成本高、产业化难度大等不足。鉴于此,本实验采用微滤与超滤技术联用精制山楂水煎液,进行微滤、超滤工艺研究,旨在为微滤-超滤法代替传统醇沉法提供实验依据。

  1材料1.1仪器微滤机(规格编号:S-XS-7-01C-07,南京九思高科技有限公司);中空纤维超滤装置(合肥凯华环保科技有限公司);超滤膜材(聚丙烯腈-6000)(合肥凯华环保科技有限公司);LIM-2离心机(北京医用离心机厂);BSll0S电子天平-185超纯水器(美国密理博公司);Agilentll00高效液相色谱仪,HPll00四元HPll00紫外二极管矩阵检测器,HPll00自动进样器,ChemStation色谱工作站(美1.2试药山楂(北京市志诚中药饮片厂);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110780 -200506、100080-200707)。所有试剂均为分析纯(北京宏盛苑化工有限公司)。

  2方法与结果2.1供试品溶液的制备2.1.1山楂提取:山楂干燥至恒重,称取500g,次加12倍水,浸泡30mm,煎煮2h,滤取药液,药渣再加10倍水煎煮2次,每次1h,合并煎煮液,共得提取液15000mL,置G45型管式离心机离心,机转速为2000r/min. 2.1.2水提醇沉处理:取提取液3000mL进行浓缩,用医用酒精将浓缩液浓度调节到70,冷藏静置再次过滤,弃去药渣,取滤液回收乙醇后进行浓缩,得水浓缩液,离心(转速为mm),取上清液冷藏,静置得药液,将药液体积补足为得水提醇沉液。

  2.1.3陶瓷膜微滤处理:将剩余提取液滤液一分为二:一份取3000mL,浓缩至1000mL,得原液:其余药液(9000mL)以陶瓷微滤膜(200nm)进行处理,待药液微滤至加入量的80时,往截留液中加入蒸馏水,继续微滤,待微滤液收集到体积等于药液加入量时(即9000mL),停止微滤并取样3000mL即200nm微滤液),浓缩至1000mL,得200nm微滤液,后进行污染膜的清洗实验。

  2.1.4超滤处理:选用50000分子量截留值的超滤柱对山楂200nm微滤液(6000mL)进行超滤,跨膜压力为0.06MPa,药液流量为400mg/min.收集6000mL液体,取3000mL浓缩至1000mL,得超滤液。将水提醇沉液、原液、200nm微滤液、超滤液进行离心,弃去沉淀,取上清液进行灌封,105灭菌30mm,进行灭菌处理。

  2.2初步稳定性考察将各样品置恒温(40),相对湿度75的条件下保存,每天观察其外观性状。原液灭菌1d即出现沉淀,水提醇沉法制备的山楂水提取液,在灭菌后的10d之内,在瓶底出现了少量的沉淀现象,200nm微滤液则在8d即出现沉淀现象,而超滤制备的山楂水提取液则无此现象,表明超滤法能较好的解决澄明度和稳定性问题。

  2.3固形物得率测定3依中国药典方法(2010年版)测定样品固形物含量方法,对原液和微滤液的固形物含量进行测定。取样品25mL,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,移置于干燥器中,于105干燥3h,冷却30mm,迅速精密称定重量,并按以下公式计算固形物得率。结果见表1.固形物得率=固药物量量100 2.4总黄酮含量测定4 2.4.1对照品溶液的制备:精密称取在干燥至恒重的芦丁对照品10mg,用50乙醇定容至50mL容量瓶中,即得对照品溶液。

  2.4.2标准曲线的制备:精密量取对照品溶液1、2、3、4、5、分别置25mL量瓶中,各加水至6mL,加5亚硝酸钠溶液1mL,摇匀,放置6mm,加10硝酸铝溶液1mL,摇匀,放置6min,加4氢氧化钠溶液10mL,再加水至刻度,摇匀,放置15min,以相应试剂为空白,立即用分光光度法,在的波长处测吸光度(A),以吸光度为纵坐标,质量浓度(C)为横坐标。绘制标准曲线。回归方程为2.4.3样品测定:精密量取上述待测液1mL于25mL容量瓶中,加水至6mL,加5亚硝酸钠溶液摇匀,放置6min,加10硝酸铝溶液1mL,摇匀,放置6mm,加4氢氧化钠溶液10mL,再加水至刻度,摇匀,放置15min,以相应试剂为空白,立即用照紫外可见分光光度法,在500nm的波长处测吸光度值(A),按照回归方程计算含量。按以下公式计算总黄酮得率。

  结果见表1.总黄酮得率=(精制液总黄酮含量/原药液总黄酮含量)X表1样品中固形物、总黄酮含量测定结果样品总黄酮含量固形物得率总黄酮得率原药液水提醇沉液2nm微滤液超滤液3讨论中药的化学成分非常复杂,通常含有生物碱、苷类、有机酸、树脂、糖类、蛋白质、氨基酸、鞣质、植物色素、汕脂和无机盐等,相对分子质量从几十至几百万5.一般说来,相对分子质量高的物质主要是胶体等非药用成分或药用性较差的成分,而药物有效成分的相对分子质量一般为几百至几干。

  由于中药中有效成分和非药用性成分相对分子质量相差较大,利用超滤分离的筛分机理,以外加压力为推动力,以超滤膜为介质,利用膜孔选择性筛分作用对物质进行截留,将溶液中的混合物分成截留液和透过液两部分,在透过溶剂的同时,透过小分子溶质,截留大分子物质,从而使组份被分离。目前超滤膜截留的粒径范围为1-20nm,相当于分子量为300-300000的各种蛋白质分子和相应粒径的胶体微粒。超滤膜分离技术除杂效果好,操作过程简单,室温条件下即可操作,能够实现清洁生产,而且超滤过程不需添加任何化学试剂,整个过程不发生相变化,对于处理一些热敏物质(如酚类物质)更显示出极大优越性。

  然而,由于中药水煎液成分复杂,含有淀粉、树胶、粘液质、蛋白质等大分子物质,导致膜在超滤前期通量锐减,膜污染严高效液相色谱法测定银翘解毒颗粒中绿原酸的含量刘环香、苏汉文、向梅先2(1.武汉大学人民医院药学部,湖北武汉,4300611;2.中南民族大学药学院,湖北武汉430074)2.5)-醇为流动相流速为1.0mL/min;柱温为35尤;检测波长为350nm.结果绿原酸的线性范围为0.024pg-0. 0.9999,平均加样回收率为93. 56,RSD=1.15(n=6)。结论该方法准确,重复性好,专属性高,适用于银翘解毒颗粒的质量控制。

  基金项目:武汉市晨光科技计划项目(SZY09005)。

  通讯作者:向梅先(1975 -),女,博士研究生,讲师,研究方向为中药及其制剂,电话:027重;随着操作进行,膜通量趋于稳定,但此时通量很小,因此药液的预处理是中药超滤前必不可少的工序,是保证分离效率与质量的关键。采用陶瓷膜错流微滤技术对中药水提取液直接进行澄清处理,有效地除去了水提液中悬浮杂质,为超滤提供了可靠的预处理。并且微滤-超滤联用技术操作简单、常温下进行,生产周期短,省去了大量乙醇试剂及浓缩蒸发过程。

  传统方法(如水提醇沉法等)的不足使中药产品难以满足国际市场及患者对药品质的曰渐苛刻的要求,也因为高新技术的欠缺而缺乏国际竞争力6-0.微滤-超滤联用技术作为一项新的精制纯化技术正慢慢的向医药行业渗透,膜技术在中药制剂生产小有应用的关键问题是设计制造适合于中药工业化生产的专用膜装置、定制膜工艺和产品的质量控制标准等还有找不到中药生产流程中的佳切入点11.本实验比较了山楂水提取液分别通过水提醇沉法和微滤-超滤联用技术精制后药液的总黄酮含量,结果表明超滤法精制山楂水提取液不仅有效成分保留率高、除杂效果好,而且能使提取液稳定性好,澄明度高,为提取液的下一步处理提供了基础。

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